D9-4 簡便で安価なGPCR活性化測定法 -TGFα切断アッセイ-

GPCR活性化測定法TGFα切断アッセイに必要な試薬の配布およびアッセイ手法の指導

[1] 支援担当者

[2] 支援技術の概要

GPCRの機能解明にはそのリガンドの活性化を簡便に評価する手法が有用である。これまで、GPCRの活性化評価には（１）細胞内カルシウムイオンの測定、（２）細胞内cAMPの濃度測定などの手法が汎用されてきた。しかし、これらの評価法では一部のGPCRの活性化しか検出できず、幅広いGPCRの活性化を測定するためには、様々な手法を用いる必要があり、経済的にも問題があった。本支援では、GPCR研究の初心者でも簡便に導入できるGPCR活性化測定法, TGFα切断アッセイ, を支援する。本法は、GPCRリガンドの簡便な活性測定、オーファンGPCRのスクリーニング、バイアスドリガンドの評価、GPCRリガンドのスクリーニングなど、様々なGPCR研究に応用可能である。

• GPCRシグナルの下流で膜結合型TGFαが遊離型として切り出される現象を基に構築された新規GPCR活性化測定法であり、感度良く、幅広いGPCRのリガンド刺激による活性化を評価できる。
• Gαi、Gαs、Gαq、Gα12/13と幅広いGPCRの下流シグナルを検出可能。
• 96穴plateあたり数百円と安価で実施できる。
• 特別な機器類が不要。
• アルカリホスファターゼ融合TGFα cDNA、キメラ型Gタンパク質cDNA（複数種）、各種GPCR cDNAを供与可能。
• 研究室に来ていただければ、実地指導可能。

[3] 支援技術の利用例

• GPCRリガンドの簡便な活性測定
• オーファンGPCRのスクリーニング
• バイアスドリガンドの評価
• GPCRリガンドのスクリーニング

[4] 支援担当者の研究概要

生理活性リゾリン脂質の産生・受容機構の生化学的な解析より、３種類のリゾリン脂質産生酵素、６種類のリゾリン脂質受容体を同定し、それら分子の解析から、リゾホスファチジン酸（LPA）、リゾホスファチジルセリン（LysoPS）などのリゾリン脂質の生理・病態時における機能解明を進めている。