D3-3 非RI細胞障害性アッセイシステム

細胞障害性を指標としたアッセイ系・スクリーニング系の構築

[1] 支援担当者

[2] 支援技術の概要

新規PD-1免疫チェックポイント阻害剤併用療法の開発にあたって、新規キレート剤前駆体を用いた非RI細胞障害性アッセイシステムを確立した。

このアッセイシステムを用いた新規スクリーニング系の構築ならびにスクリーニングの実施を支援。

本システムでは、マルチプレートリーダー（PHERAstar）を用いて、時間分解蛍光を測定。

[3] 支援技術の利用例

• CD8陽性キラーαβ型T細胞が、MHCクラスI／抗原性ペプチド複合体を認識する際の細胞障害性を測定。
• γδ型T細胞が非ペプチド性抗原を認識する際の細胞障害性を測定。
• NK細胞がK562などの腫瘍細胞を認識する際の細胞障害性を測定。
• CD16陽性免疫エフェクター細胞による抗原依存的細胞障害性を測定。

[4] 支援担当者の研究概要

支援者らは、これまでに、PD-1免疫チェックポイント阻害作用のある抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体などを樹立し、in vitro及びin vivoの系において、これらの抗体が抗腫瘍効果を示すことを明らかにしてきた。その際、in vitroにおける細胞障害アッセイは、放射線を用いたクロミウムリリース法を用いてきた。しかし、ハイスループット実験を行う際には、γ線などの放射線を用いることは困難である。そこで、新規キレート剤前駆体を有機合成し、非RI細胞障害性アッセイシステムを構築した。

実際の実験手順は以下のとおりである。

• 新規キレート剤前駆体により、標的細胞を標識する。
• 標的細胞内で、加水分解酵素によりキレート剤前駆体が、キレート剤になる。
• 標識化した標的細胞に免疫エフェクター細胞を作用させる。
• 標的細胞が障害を受けると、キレート剤が漏出する。
• 培養上清にEuを添加し、時間分解蛍光を測定する。